本產品可以通過陰性分選法從人外周血單個核細胞(PBMC)中分離出CD3+ T細胞。原理是選用生 物素(biotin)標記的單克隆抗體對非目標細胞(非CD3+ T細胞)進行標記，然后通過鏈霉親和素 (streptavidin)標記的磁珠對非目標細胞進行清除，從而達到人外周血CD3+ T細胞分選的目的。分 選過程需要用到磁力架。 

2-8°C保存，不可冷凍，有效期見試管標簽。

本試劑盒適用于從人PBMC中分選出CD3+ T細胞。

1. 制備人PBMC：利用Ficoll密度梯度離心法從人外周血中分離PBMC，收集PBMC，以PBS洗滌細胞，離心后將PBMC重懸于分選buffer中，調整細胞密度為1×108 cells/ml。

注意：分選buffer為含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5%BSA的PBS，需預先通過0.22 μm濾膜過濾除菌。
2. 將100 μl 細胞懸液(1×107個細胞)加入無菌流式管底部，再加入10 μl Biotin-Antibody Mix，混勻后4°C孵育10 min。

注意：加入細胞懸液時將細胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根據所使用磁力架不同也可使用離心管進行細胞分選。如果分選更多細胞，則按比例增加Biotin-Antibody Mix的用量。

3.孵育完成后，在流式管中加入30 μl 清洗過的BeaverBeads® Streptavidin(磁珠使用前需要用分選buffer進行清洗：渦旋振蕩重懸磁珠，吸取實驗需要的磁珠至1.5 ml離心管，加入1 ml分選buffer，10000 g離心1 min，棄上清。加入1 ml分選buffer重復洗滌磁珠1次后用與原來相同體
積的分選buffer重懸磁珠。如吸取30 μl磁珠進行清洗，則清洗后用30 μl分選buffer進行重懸)，混勻后4°C孵育10 min。
注意：如果分選更多細胞，則按比例增加BeaverBeads® Streptavidin用量。例如分選5×107個細胞，在500 μl細胞懸液中加入50 μl Biotin-Antibody Mix和150 μl BeaverBeads® Streptavidin。如果分選少于1×107個細胞，則將細胞懸液體積補至100 μl，加入10 μl Biotin-Antibody Mix和30 μl BeaverBeads® Streptavidin。

4. 孵育完成后，在流式管中加入2.5 ml 分選buffer，用移液器上下混合吹打5次混勻(避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻)。

5. 將含有細胞的分選流式管置于磁力架上，靜置5 min。

6. 將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中(傾倒過程中流式管不要脫離磁力架)，此細胞懸液中即包含純化的人CD3+ T細胞，300 g，離心5 min。離心后棄上清，收集細胞。
7. 根據實驗需要洗滌細胞后，將細胞重懸于所需緩沖液或培養基中，即可用于后續分子生物學或細胞生物學實驗。

從人PBMC中分選CD3+ T細胞，分選前 后的細胞用PE anti-human CD3抗體(克 隆號OKT3)標記后進行流式細胞儀分析， 分選前后的CD3+ T細胞純度分別為 69.1%和97.9%。 

1. 磁珠和抗體混合液使用和保存過程中均應避免冷凍、高速離心等操作；